OBJETIVO:
Esta atividade laboratorial teve como objetivo compreender o processo necessário à extração do DNA em células vegetais, nomeadamente, células de um kiwi.
MATERIAL USADO NA EXPERIÊNCIA:
- Kiwi;
- Almofariz e pilão;
- Vidro de relógio;
- Balança;
- Bisturi;
- Gobelé;
- Manta de Aquecimento;
- Gaze;
- Proveta de 100 ml;
- Lâminas e Lamelas;
- Tubo de ensaio;
- Vareta;
- Água destilada;
- Detergente da louça;
- Cloreto de Sódio(sal);
- Etanol (a 5ºC);
- Fucsina básica;
- Microscópio ótico.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL:
- Descascar um kiwi, cortá-lo em pequenos cubos e esmagá-lo num almofariz.
Ao esmagarmos a respetiva fruta estamos a separar os seus tecidos.
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
- Pesar 3g de NaCl, medir 100ml de H2O e 10ml de detergente da louça.
- Utilizando uma proveta de 100ml, misturar os ingredientes anteriormente referidos até formar uma solução homogénea.
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
- Misturar o kiwi triturado com a solução anterior num gobelé.
Ao adicionarmos o detergente estamos a destruir a membrana nuclear e a membrana celular para que o DNA possa sair do núcleo. Ao adicionarmos o cloreto de sódio estamos a polarizar a molécula de DNA.
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| Ana Veiga, 2014 |
- Colocar o preparado anterior em banho maria a 37ºC durante 15 minutos.
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| Ana Veiga, 2014 |
- Retirar o preparado do banho maria e colocar sobre o balcão para deixar arrefecer.
- Filtrar com ajuda de uma gaze de forma a obter 5ml de líquido para um tubo de ensaio.
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
- Adicionar, lentamente, 5ml de etanol 96% (frio).
Este processo, através de um choque térmico, faz com que se criem pequenas bolhas de ar que posteriormente se vão juntar ao DNA diminuindo-lhe a sua densidade.
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| Ricardo Gomes, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
- Deixar repousar até se conseguir observar a ascensão de uma camada gelatinosa, que são os filamentos de DNA.
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
- Retirar parte da camada gelatinosa, colocar numa lâmina, juntar o corante Fucsina Básica e colocar uma lamela sobre a amostra, permitindo assim a visualização do DNA do kiwi ao microscópio ótico.
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 |
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| Ana Veiga, 2014 4x10 |
CONCLUSÃO:
Através deste procedimento experimental conseguimos atingir o objetivo inicialmente proposto, no entanto não foi possível observar a molécula de DNA, pois esta só é visível durante a sua divisão, quando se encontra condensada.
